ВСЕ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО УЗБЕКИСТАНА
Законодательство РУз / Общие вопросы хозяйственной и предпринимательской деятельности / Качество продукции. Стандартизация. Сертификация. Метрология / Стандартизация / Межгосударственные стандарты (Приняты Межгосударственным Советом по СМиС) / Молочная продукция; яйца птиц; мед натуральный; пищевые продукты животного происхождения /ГОСТ 30627.1-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина А (ретинола)
Полный текст документа доступен в платной версии. По вопросам звоните на короткий номер 1172
ГОСТ 30627.1-98
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ
ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
Метод измерения массовой доли
витамина А (ретинола)
Infant milk products. Method for determination
of mass part of vitamin A (Retinoli)
Дата введения 2000-05-01
Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина А (ретинола).
Метод основан на реакции витамина А, выделенного из продукта при щелочном гидролизе, с треххлористой сурьмой (реакция Карра-Прайса) и колориметрическом измерении интенсивности окрашивания образовавшегося соединения.
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия;
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия;
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия;
ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия;
ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа;
ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов;
ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов;
ГОСТ 5815-77 Ангидрид уксусный. Технические условия;
ГОСТ 5845-79 Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия;
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия;
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия;
ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия;
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия;
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия;
ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия;
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия;
ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия;
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры;
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу;
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний;
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования.
Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.
4. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С с погрешностью ±2°С.
Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Воронки стеклянные лабораторные типа В по ГОСТ 25336.
Воронки делительные номинальной вместимостью 250, 500 куб. см по ГОСТ 25336.
Испаритель ротационный [1].
Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100, 250, 500 и 1000 куб. см по ГОСТ 25336.
Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 100, 200, 250, 500 куб. см по ГОСТ 1770.
Колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения от 200 до 2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [2].
Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 5, 10 куб. см по ГОСТ 29227.
Стакан фарфоровый номинальной вместимостью 500 куб. см по ГОСТ 9147.
Секундомер [3].
Термометр жидкостный (не ртутный) диапазоном измерения от 0 до 100°С ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.
Холодильник обратимый со шлифами и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.
Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения от 220 до 1100 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [4].
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 50, 100, 250, 500 куб. см по ГОСТ 1770.
Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200°С с погрешностью ±2°С.
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.
Ангидрид уксусный ч.д.а. по ГОСТ 5815.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Калий-натрий виннокислый ч.д.а. по ГОСТ 5845.
Калия гидроокись х.ч. по ГОСТ 24363.
Кислота аскорбиновая (витамин С) [5].
Натрий сернокислый безводный х.ч. по ГОСТ 4166.
Ретинола пальмитат (витамина А пальмитат) [6] или масляный раствор массовой концентрации ретинола пальмитата 550 г/куб. дм (55%-ный раствор пальмитата в масле) [7], или ретинола ацетата (витамин А ацетат) [8], или масляный раствор массовой концентрации ретинола ацетата 34,4; 68,8; 86,0 г/куб. дм (3,44; 6,88 или 8,60% раствор ретинола ацетата в масле) [9].
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Сурьма треххлористая х.ч. [10].
Хлороформ х.ч. по ГОСТ 20015.
Фенолфталеин ч.д.а. [11].
Циклогексан [12].
Эфир петролейный, перегнанный при (50+10)°С, не содержащий перекисей [13].
Эфир этиловый по ГОСТ 8981.
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Хранение растворов по ГОСТ 4212.
Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.
5. УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЯ
Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете в помещении, в связи с разрушением витамина А под воздействием ультрафиолетовых лучей.
Треххлористая сурьма при попадании на кожу вызывает ожоги. Место поражения промывают ацетоном, затем водой.
Работу с хлороформом, уксусным ангидридом, диэтиловым и петролейным эфирами необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.
Посуду после раствора треххлористой сурьмы и кюветы после измерений нужно промывать водным раствором калия-натрия виннокислого массовой концентрации 0,1 г/куб. см.
6. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЯ
6.1. Приготовление раствора треххлористой
сурьмы (реактив Карра-Прайса)
Взвешивают (60,0+0,4) г треххлористой сурьмы на весах 4-го класса точности в конической колбе вместимостью 500 куб. см, в которую предварительно отмерено 300 куб. см хлороформа, и растворяют при подогревании на водяной бане (40+2)°С, периодически встряхивая. Раствор охлаждают до (20+5)°С, добавляют 6-9 куб. см уксусного ангидрида, колбу закрывают и оставляют на 14-18 ч. для отстаивания. Полученный прозрачный раствор осторожно сливают в колбу из темного стекла с плотно закрывающейся пробкой. Срок хранения реактива - не более 40 сут. при (20+5)°С.
6.2. Приготовление водного раствора гидроокиси
калия массовой концентрации 0,5 г/куб. см
Взвешивают (125,0+0,4) г гидроокиси калия на весах 4-го класса точности, растворяют в 100-150 куб. см дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20±5)°С, фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 куб. см, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
6.3. Приготовление спиртового раствора
фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/куб. см
(1,00+0,01) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 куб. см этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, добавляют 30 куб. см дистиллированной воды и перемешивают.
6.4. Обезвоживание сернокислого натрия
Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150+10)°С 8-12 ч. Хранят в эксикаторе.
6.5. Приготовление раствора калия-натрия
виннокислого массовой концентрации 0,1 г/куб. см
(10,0±0,4) г калия-натрия виннокислого (сегнетова соль), взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 40-60 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
6.6. Проверка препарата витамина А
Взвешивают (0,100±0,002) г препарата на весах 2-го класса точности, растворяют в абсолютном спирте в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят объем раствора до метки тем же спиртом и перемешивают. Отбирают 2 куб. см полученного раствора при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 86,0 г/куб. дм, 2,5 куб. см - при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 68,8 г/куб. дм, 5 куб. см - при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 34,4 г/куб. дм, 0,3 куб. см - при использовании раствора массовой концентрации ретинола пальмитата в масле 550 г/куб. дм и разводят в мерной колбе вместимостью 50 куб. см, доводят до метки тем же спиртом, получая конечный раствор массовой концентрации ретинола ацетата или ретинола пальмитата 3 мкг/куб. см (8-10 МЕ/куб. см).
Измеряют оптическую плотность полученного раствора на фотометре при длине волны 326 нм в кювете с толщиной слоя 1 куб. см.
В качестве контрольного раствора применяют абсолютный спирт.
Массовую долю витамина А (ретинола ацетата или ретинола пальмитата) в препарате m, млн-1, вычисляют по формуле:
где: 0,01 - массовая концентрация витамина А для 1%-ного раствора ретинола ацетата или ретинола пальмитата в абсолютном спирте, г/куб. см;
D - оптическая плотность анализируемого раствора;
V1 - объем раствора второго разведения, куб. см;
100 - объем раствора первого разведения, взятый для приготовления раствора второго разведения, куб. см;
m1 - масса навески препарата, г;
Е - удельный показатель поглощения при длине волны 326 нм, который для 100%-ного раствора ретинола ацетата в абсолютном спирте равен 1550, а для 100%-ного раствора ретинола пальмината в абсолютном спирте равен 975;
V - объем раствора, взятый для второго разведения, куб. см.
Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют результат до первого десятичного знака.
Примечание. Определение может быть проведено с использованием циклогексана вместо абсолютного спирта. В этом случае готовят раствор препарата в циклогексане массовой концентрации ретинола ацетата 3 мкг/куб. см и измеряют оптическую плотность этого раствора при длине волны 327,5 нм. В данном случае Е=1515.
6.7. Построение калибровочного графика
Взвешивают (0,100+0,002) г препарата витамина А - ацетата или пальмитата на весах 2-го класса точности в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, растворяют в хлороформе, доводят хлороформом до метки и перемешивают
Массовую концентрацию витамина А в растворе Х1, Х2, МЕ/куб. см, вычисляют по формулам:
где: m - массовая доля витамина А (ретинол ацетата или ретинол пальмитата) в препарате, %;
m1 - масса навески препарата, г;
2907000 - активность 1 г витамина А (ретинол ацетата) с массовой долей 100% в абсолютном спирте, ME;
1807000 - активность 1 г витамина А (ретинол пальмитата) с массовой долей 100% в абсолютном спирте, ME;
100 - объем хлороформенного раствора препарата витамина А, куб. см.
Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют результат до первого десятичного знака.
Для построения калибровочного графика из полученного раствора витамина А рассчитанной массовой концентрации последовательно готовят разведения массовой концентрации 5-20 МЕ/куб. см с интервалом в 5 МЕ/куб. см.
Из каждого разведения отбирают пипеткой номинальной вместимостью 1,0 куб. см по 0,4 куб. см раствора, вносят в кювету толщиной слоя 1 см, помещают кювету в кюветодержатель фотометра или колориметра, добавляют 4 куб. см раствора треххлористой сурьмы и быстро (не более 5 с.) измеряют оптическую плотность при длине волны 620 нм (красный светофильтр), устанавливая в параллельный световой поток такую же кювету, наполненную хлороформом.
Для построения калибровочного графика по оси ординат откладывают полученные значения оптической плотности, а по оси абсцисс - соответствующие им массовые концентрации витамина А в МЕ/куб. см. Длина осей графика должна быть не менее 200 мм. При смене раствора треххлористой сурьмы построение калибровочного графика повторяют, используя при этом свежеприготовленный раствор витамина А в хлороформе.
6.8. Щелочной гидролиз продукта (омыление)
Отобранную для анализа пробу жидких продуктов прогревают при (37±1)°С 30-40 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.
Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина А в продукте.
Массовая доля витамина А, млн-1 |
Навеска сухого продукта, г |
0,5-1,5 |
6,00+0,01 |
1,5-3,0 |
4,00±0,01 |
3,0-5,0 |
3,00+0,01 |
Навеска жидкого продукта - (15,00+0,01) г.
Навеску продукта помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 20 куб. см дистиллированной воды (для сухих продуктов), перемешивают встряхиванием до полного растворения, добавляют (0,10+0,03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 куб. см этилового ректификованного спирта и, перемешивая, вносят 5,0-7,0 куб. см водного раствора массовой концентрации гидроокиси калия 0,5 г/куб. см.
Колбу соединяют с водяным обратным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (30+2) мин.
По окончании омыления содержимое колбы охлаждают до (20+5)°С, и количественно переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см. Колбу ополаскивают 50 куб. см дистиллированной воды, воду сливают в ту же делительную воронку.
Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути процесс омыления повторяют, при этом увеличивают объем щелочи до 10 куб. см и время омыления до (35±2) мин.
Неомыляемые вещества экстрагируют петролейным или диэтиловым эфиром три раза по 50 куб. см. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.
Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 500-700 куб. см дистиллированной воды.
Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20-30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. Фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 куб. см.
Эфир отгоняют на ротационном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани (не более 30°С - для диэтилового эфира и не более 50°С - для петролейного эфира).
Неомыляемый остаток на стенках колбы немедленно растворяют в хлороформе. При расчетной массовой доле витамина А в продукте 0,5-1,5 млн-1 остаток растворяют в 2 куб. см хлороформа, 1,5- 5 млн-1 - в 3 куб. см хлороформа. Закрыв колбу пробкой, смывают осадок со стенок колбы.
Измерение проводят при длине волны 620 нм (красный светофильтр), используя в качестве контрольного раствора хлороформ.
Пипеткой вместимостью 1 куб. см вносят 0,4 куб. см хлороформенного раствора испытуемой пробы в кювету толщиной слоя 1 куб. см, помещают кювету в кюветодержатель фотометра, добавляют 4,0 куб. см раствора треххлористой сурьмы и быстро (не более 5 с.) измеряют оптическую плотность. При наличии витамина проба окрашивается в голубой цвет. Окраска быстро исчезает и раствор становится прозрачным.
Помутнение раствора свидетельствует о попадании воды с испытуемым раствором или с раствором сурьмы. В этом случае следует проверить раствор треххлористой сурьмы и при необходимости приготовить свежий. Анализ повторить.
8. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЯ
Массовую долю витамина А (ретинола) X, млн-1, вычисляют по формуле:
где: С - активность витамина А анализируемого раствора продукта, установленная по калибровочному графику, МЕ/куб. см;
V - объем раствора неомыляемых веществ в хлороформе, куб. см;
0,303 - коэффициент пересчета витамина А из ME в мкг;
m - масса навески продукта, г,
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Относительная погрешность измерения массовой доли витамина А - ±20% при доверительной вероятности Р=0,95.
Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 10% среднего арифметического значения результатов измерений.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.
(информационное)
БИБЛИОГРАФИЯ
[1] ТУ 25- 1) -917-76 Испаритель ротационный ИР-1М
[2] ТУ З-КРАЮ.414216.001- 90 Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2Ц
[3] ТУ 25-1819.0021-90 Секундомеры механические "Слава"
[4] ТУ 3-3.2164-89 Фотометр фотоэлектрический КФК-3
[5] ГФ СССР-X ст. 6 Кислота аскорбиновая
[6] ВФС 42-2229 Ретинола пальмитат (витамин А пальмитат)
[7] ФС 42-1875 Раствор ретинола палъмитата 55% в масле
[8] ГФ СССР-X ст. 578 Ретинола ацетат (витамин А ацетат)
[9] ГФ СССР-Х ст. 579 Раствор ретинола ацетата 3,44, 6, 88 или 8,60% в масле
[10] ТУ 6-09-17-252-88 Сурьма (III) хлорид (сурьма треххлористая)
[11] ТУ 6-09-5360-87 Фенолфталеин
[12] ТУ 6-09-10-592-87 Циклогексан
[13] ТУ 6-02-1244-83 Эфир петролейный
УДК 637.1:543.06:006.354 МКС 67.100.10 Н19 ОКСТУ 9209
Ключевые слова: витамин А (ретинол), щелочной гидролиз (омыление), экстракция, отгонка растворителя, колориметрический метод