ГОСТ 30627.3-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина Е (токоферола)

Функция недоступна

ГОСТ 30627.3-98

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ

ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ

Метод измерения массовой доли

витамина Е (токоферола)

Infant milk products. Method for determination

of mass part of vitamin E (Tocopheroli)

Дата введения 2000-05-01

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания, обогащенные витамином Е (токоферолом), и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина Е.

Метод основан на реакции восстановления токоферолами трехвалентного железа в двухвалентное с образованием окрашенного комплекса двухвалентного железа с ортофенантролином (батофенантролином или α, α-дипиридилом).

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия;

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия;

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия;

ГОСТ 4147-74 Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия;

ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия;

ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа;

ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов;

ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов;

ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические требования;

ГОСТ 6552-80 Кислота ортофосфорная. Технические условия;

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия;

ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия;

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия;

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия;

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия;

ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия;

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры;

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу;

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний;

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования.

3. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.

4. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С с погрешностью ±2°С.

Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.

Воронки делительные номинальной вместимостью 250 куб. см по ГОСТ 25336.

Воронки стеклянные типа В диаметром 56 мм по ГОСТ 25336.

Испаритель ротационный ИР-1М [1].

Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 50, 100 куб. см по ГОСТ 1770.

Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100 куб. см по ГОСТ 25336.

Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 куб. см по ГОСТ 29227.

Пробирки стеклянные типа П4 номинальной вместимостью 10 и 20 куб. см по ГОСТ 25336.

Секундомер 2-го класса [2].

Стакан исполнения 3 номинальной вместимостью 1000 куб. см по ГОСТ 9147.

Термометр жидкостный (не ртутный) диапазоном измерения 0-100°С ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.

Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения 220-1100 нм [3] или колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения 200-2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания 100-1% [4].

Холодильник обратимый со шлифом и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.

Цилиндры исполнения 1 вместимостью 25, 50 куб. см по ГОСТ 1770.

Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.

Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200°С с погрешностью ±2°С.

Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336

Аскорбиновая кислота (витамин С) [5].

Батофенантролин α, α-дипиридил (4, 4-дипиридил) [6].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Железо треххлористое 6-водное ч. по ГОСТ 4147.

Калия гидроокись х. ч. по ГОСТ 24363.

Натрий сернокислый безводный х. ч. по ГОСТ 4166.

Ортофенантролин [7].

Ортофосфорная кислота ч. по ГОСТ 6552.

Спирт абсолютный [8].

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Токоферола ацетат (витамин Е ацетат) [9] или масляный раствор массовой концентрации α-токоферола ацетата 300 г/куб. дм (с массовой долей α-токоферола ацетата в масле 30%) [10].

Фенолфталеин ч.д.а. [11].

Эфир петролейный [12], перегнанный при температуре (50+10)°С, не содержащий перекисей.

Эфир этиловый по ГОСТ 8981.

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

Хранение растворов по ГОСТ 4212.

Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.

5. УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЯ

Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете, в связи с разрушением витамина Е под воздействием ультрафиолетовых лучей.

Работу с эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.

6. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ

ИЗМЕРЕНИЯ

6.1. Приготовление спиртового раствора треххлористого

железа массовой концентрации 2 мг/куб. см

(0,200+0,001) г треххлористого железа, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 куб. см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

Раствор хранят в склянке из темного стекла при (6+2)°С.

6.2. Приготовление спиртового раствора треххлористого

железа массовой концентрации 0,25 мг/куб. см

1,25 куб. см раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/куб. см смешивают с 8,75 куб. см абсолютного спирта и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед применением.

6.3. Приготовление раствора молярной концентрации

с (Н3РО4) = 0,03 моль/куб. дм в абсолютном спирте

(0,327 ± 0,001) г ортофосфорной кислоты, взвешенной на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 куб. см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

6.4. Приготовление спиртового раствора ортофенантролина

или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/куб. см

(0,100+0,001) г ортофенантролина, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 куб. см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

6.5. Приготовление спиртового раствора α, α-дипиридила

(4, 4-дипиридила) массовой концентрации 5 мг/куб. см

(0,500 ±0,001) г α, α-дипиридила, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 куб. см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

Спиртовые растворы ортофенантролина, батофенантролина и α, α-дипиридила хранят в склянке из темного стекла при (6±2)°С.

6.6. Приготовление спиртового раствора фенолфталеина

массовой концентрации 10 мг/куб. см

(1,00+0,04) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 куб. см этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, добавляют 30 куб. см дистиллированной воды и перемешивают.

6.7. Приготовление водного раствора гидроокиси калия

массовой концентрации 0,5 г/куб. см

(125,0+0,1) г гидроокиси калия, взвешенной на весах 4-го класса точности, растворяют в 100-150 куб. см дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20±5)°С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 куб. см, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

6.8. Обезвоживание сернокислого натрия

Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150+10)°С 8-12 ч. Хранят в эксикаторе.

6.9. Приготовление стандартного раствора

α-токоферола

(0,040±0,001) г 100%-ного препарата витамина Е, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 50 куб. см абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 куб. см и доводят объем до метки этим же спиртом.

6.9.1. Гидролиз

В круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 5 куб. см полученного по 6.9 стандартного раствора витамина, добавляют 15 куб. см этилового спирта, (0,10+0,03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, 1 куб. см гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/куб. см и перемешивают. Колбу соединяют с обратным водяным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (18+2) мин.

6.9.2. Экстракция

По окончании гидролиза содержимое колбы охлаждают до (20+5)°С и количественно переносят в делительную воронку. Колбу ополаскивают 50 куб. см дистиллированной воды, воду сливают в ту же воронку.

Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути гидролиз повторяют, увеличивая при этом объем щелочи до 2 куб. см или время гидролиза до (30±2) мин.

Неомыляемые вещества экстрагируют диэтиловым или петролейным эфиром три раза по 25 куб. см. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.

6.9.3. Промывка

Объединенный эфирный экстракт (верхний слой) переносят в делительную воронку и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 50-60 куб. см дистиллированной воды.

Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20-30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. По окончании фильтрования фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 куб. см.

6.9.4. Отгонка растворителя

Колбу с фильтратом подсоединяют к роторному испарителю и отгоняют эфир под вакуумом при температуре водяной бани не более 30°С для диэтилового эфира и не более 50°С - для петролейного эфира.

Неомыляемый остаток растворяют в абсолютном спирте и доводят объем до 100 куб. см этим же спиртом.

Если используют препарат витамина Е другой концентрации, то навеску рассчитывают так, чтобы конечная концентрация стандартного раствора (после гидролиза) составляла не менее 20 мкг/куб. см.

6.9.5. Проверка концентрации стандартного

раствора α-токоферола

В полученном растворе определяют массовую концентрацию α-токоферола, измеряя оптическую плотность спиртового раствора при длине волны 292 нм.

Массовую концентрацию α-токоферола ρЕ, мкг/куб. см вычисляют по формуле:

ρE=D 10000/Е,                                   (1)

где: D - оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 292 нм против абсолютного спирта;

10000 - масса α-токоферола в 1 куб. см 1%-ного раствора, мкг;

Е - удельный показатель поглощения при длине волны 292 нм для 1%-ного раствора α-токоферола в абсолютном спирте, равен 74,7.

6.9.6. Построение калибровочного графика

В пять пробирок вносят по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0 куб. см полученного стандартного раствора и доводят объем в каждой пробирке абсолютным спиртом до 5 куб. см. В шестую пробирку вносят 5,0 куб. см абсолютного спирта (холостая проба). Затем во все пробирки приливают по 0,5 куб. см раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/куб. см, или α, α-дипиридила массовой концентрации 5 мг/куб. см, добавляют 0,5 куб. см раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/куб. см, перемешивают и не более чем через 20 с добавляют 0,5 куб. см раствора ортофосфорной кислоты молярной концентрации с (Н3РО4) = 0,03 моль/куб. дм и снова перемешивают. Реакцию проводят с каждой пробиркой отдельно.

Определяют оптическую плотность на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.

Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают массу α-токоферола от 5 до 20 мкг, а по оси ординат - разность показаний прибора между испытуемым раствором и холостой пробой.

Построение калибровочного графика повторяют при смене прибора или одного из реактивов, необходимых для проведения реакции.

6.10. Щелочной гидролиз продукта

Для жидких и пастообразных продуктов отобранную для анализа пробу прогревают при 37°С 20-30 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.

Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина Е в продукте.

Навеска жидкого и пастообразного продукта - (15+0,01) г.

Навеску помещают в круглодонную колбу роторного испарителя вместимостью 100 куб. см. К навеске для сухого продукта добавляют (9+1) куб. см дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. В круглодонную колбу ротационного испарителя к навеске продукта добавляют 100- 150 мг аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 куб. см этилового спирта и, перемешивая, вносят 5-7 куб. см раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/куб. см.

Колбу соединяют с обратным холодильником и выдерживают при температуре кипения смеси на водяной бане в течение (30+1) мин.

6.11. Экстракция

Экстракцию и последующие операции проводят в соответствии с 6.9.2-6.9.4.

Эфирный экстракт помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Эфир выпаривают на ротационном испарителе согласно 6.9.4, а сухой остаток немедленно растворяют в 15 куб. см абсолютного спирта.

7. ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЯ

Оптическую плотность измеряют на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.

1,0-5,0 куб. см полученного раствора (в зависимости от массовой доли витамина Е в продукте) помещают в пробирку, доводят объем раствора до 5 куб. см абсолютным спиртом и перемешивают. Затем проводят реакцию согласно 6.9.6. Проводят параллельные измерения в двух пробирках и берут средний результат. В третьей пробирке готовят холостую пробу согласно 6.9.6.

8. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Массовую долю витамина Е (токоферола) X, млн-1, вычисляют по формуле:

где: m - масса витамина Е в анализируемом растворе продукта, установленная по калибровочному графику (по разнице показаний оптической плотности между анализируемым раствором и холостой пробой), мкг;

V1 - общий объем анализируемого раствора в абсолютном спирте после экстракции, куб. см;

V2 - объем спиртового раствора, взятый на проведение цветной реакции, куб. см;

m1 - масса продукта, взятая на гидролиз, г.

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.

Относительная погрешность измерения массовой доли витамина Е - ±20% при доверительной вероятности Р = 0,95.

Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 15% среднего арифметического значения результатов измерений.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(информационное)

БИБЛИОГРАФИЯ

[1] ТУ 25-11-917-76 Испаритель ротационный ИР-1М

[2] ТУ 25-1819.0021-90 Секундомеры механические "Слава"

[3] ТУ 3-3.2164-89 Фотометр фотоэлектрический КФК-3

[4] ТУ З-КРАЮ.414216.001-90 Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2Ц.

[5] ГФ СССР-X ст. 6 Кислота аскорбиновая

[6] ТУ 6-09-15-139-86 Батофенантролин

[7] ТУ 8П-399-70 Ортофенантролин

[8] ТУ 18-3-2-76 Спирт абсолютный

[9] ГФ СССР-X ст. 695 Токоферола ацетат (витамина Е ацетат)

[10] ВФС 42-1642 Раствор α-токоферола ацетата 5, 10 или 30% в масле

[11] ТУ 6-09-5360-87 Фенолфталеин

[12] ТУ 6-02-1244-83 Эфир петролейный

УДК 637.1:543.06:006.354 МКС 67.100.10 Н19 ОКСТУ 9209

Ключевые слова: витамин Е (токоферол), гидролиз, экстракция, построение калибровочного графика