ГОСТ 30627.5-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина B1 (тиамина)

Функция недоступна

ГОСТ 30627.5-98

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ

ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ

Метод измерения массовой доли

витамина B1 (тиамина)

Infant milk products. Method for determination

of mass part of vitamin B1 (thiarnini)

Дата введения 2000-05-01

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания и устанавливает флюорометрический метод измерения массовой доли витамина B1 (тиамин).

Метод основан на окислении витамина В1 в щелочной среде железосинеродистым калием с образованием сильно флюоресцирующего в ультрафиолетовом свете соединения - тиохрома, интенсивность флюоресценции которого прямо пропорциональна массовой доле витамина В1.

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия;

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия;

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия;

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия;

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия;

ГОСТ 4206-75 Калий железосинеродистый. Технические условия;

ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа;

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия;

ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов;

ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов;

ГОСТ 5789-78 Толуол. Технические условия;

ГОСТ 6006-78 Бутанол-1. Технические условия;

ГОСТ 6016-77 Спирт изобутиловый. Технические условия;

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия;

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия;

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия;

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия;

ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля рН молока и молочных продуктов. Общие технические условия;

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия;

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры;

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу;

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний;

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

3. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.

4. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Анализатор потенциометрический диапазоном измерения от 3,5 до 8 ед. рН ценой деления шкалы 0,05 ед. рН по ГОСТ 19881.

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С с погрешностью ±2°С.

Баня глицериновая или песочная.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.

Воронки стеклянные лабораторные типа В по ГОСТ 25336.

Воронки делительные номинальной вместимостью 250 куб. см по ГОСТ 25336.

Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 25, 100, 500, 1000 куб. см по ГОСТ 1770.

Колбы типа Кн исполнения 2 номинальной вместимостью 100, 250 куб. см по ГОСТ 25336.

Пипетки исполнений 4, 5, 6,7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1,2, 5, 25 куб. см по ГОСТ 29227.

Секундомер [1].

Стаканы типа В исполнения 1 номинальной вместимостью 50, 600 куб. см по ГОСТ 25336.

Стакан фарфоровый номинальной вместимостью 500 куб. см по ГОСТ 9147.

Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.

Термометр жидкостный (нертутный) диапазон измерения от 0 до 100°С с ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.

Термостат, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 0 до 60°С с погрешностью ±0,8°С.

Флюорометр любого типа с набором светофильтров.

Цилиндры исполнения 1 вместимостью 50, 250, 500 куб. см по ГОСТ 1770.

Часы класса 2 по ГОСТ 3145 или часы песочные.

Шкаф вакуумный сушильный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима в диапазоне от 0 до 200°С с погрешностью ±2°С.

Шкаф вытяжной.

Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.

Натрия гидроокись ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4328.

Спирт изобутиловый ч.д.а. по ГОСТ 6016 или спирт бутиловый ч.д.а. по ГОСТ 6006.

Активированный уголь.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Калий железосинеродистый ч.д.а. по ГОСТ 4206.

Кислота соляная х.ч. по ГОСТ 3118.

Кислота серная ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4204.

Натрий уксуснокислый 3-водный чд.а. или х.ч. по ГОСТ 199.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.

Тиамина хлорид (витамин В1) [2].

Толуол ч.д.а. по ГОСТ 5789.

Ферментный препарат амилоризин [3] или пектофоэтидин П10Х [4].

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

Хранение растворов по ГОСТ 4212.

Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.

5. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ

ИЗМЕРЕНИЯ

5.1. Приготовление водного раствора

железосинеродистого калия массовой

концентрации 0,01 г/куб. см

Взвешивают (1,00 ± 0,04) г железосинеродистого калия на весах 4-го класса точности и растворяют в 20-30 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 куб. см, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Раствор хранят в темном месте не более 2 сут.

5.2. Приготовление водного раствора

гидроокиси натрия массовой концентрации

0,3 г/куб. см

(30,00 ± 0,04) г гидроокиси натрия, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 30 - 50 куб. см дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20±5)°С, переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.3. Приготовление окислительной смеси

К 2 куб. см водного раствора железосинеродистого калия массовой концентрации 0,01 г/куб. см прибавляют 10 куб. см водного раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,3 г/куб. см и перемешивают.

Смесь пригодна не более 3 ч.

5.4. Приготовление основного стандартного

раствора тиамина массовой концентрации

0,1 мг/куб. см

Взвешивают (0,100 ± 0,001) г тиамина хлорида на весах 2-го класса точности, высушенного в эксикаторе над серной кислотой в течение 10 сут или 1-2 ч. в вакуумном сушильном шкафу при (60±5)°С, растворяют в 200-300 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 куб. см, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Раствор хранят при (6±2)°С в темном месте не более 2 мес.

5.5. Приготовление рабочего раствора

тиамина массовой концентрации 1 мкг/куб. см

1 куб. см основного стандартного раствора тиамина массовой концентрации 0,1 мг/куб. см, приготовленного по 5.4, переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Рабочий раствор готовят в день проведения измерения.

5.6. Приготовление водного раствора соляной

кислоты молярной концентрации

с (НСl) = 0,1 моль/куб. дм

8,3 куб. см концентрированной соляной кислоты плотностью 1,185 г/куб. см растворяют в 300-500 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 куб. см, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.7. Приготовление насыщенного раствора

уксуснокислого натрия

Взвешивают (200,0±0,4) г уксуснокислого натрия на весах 4-го класса точности и растворяют в 100-200 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 500 куб. см, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.8. Очистка бутилового и изобутилового спиртов

Перед проведением анализа спирты проверяют на отсутствие флюоресценции (измеряют флюоресценцию используемых в работе спиртов в сравнении с дистиллированной водой).

В случае наличия флюоресценции спирт очищают. К 1 куб. дм спирта прибавляют 15-20 г активированного угля, встряхивают 30 мин. и оставляют на сутки, затем декантируют, фильтруют через бумажный фильтр и перегоняют: бутиловый и изобутиловый спирты - на глицериновой или песочной бане, этиловый спирт - на водяной бане.

5.9. Гидролиз

Взвешивают (6,00±0,04) г продукта на весах 4-го класса точности, помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 150 куб. см водного раствора соляной кислоты молярной концентрации с (НСl) = 0,1 моль/куб. дм и кипятят на водяной бане (40±1) мин.

Затем гидролизат охлаждают до (20+5)°С, доводят активную кислотность до рН = 4,5 с помощью насыщенного раствора уксуснокислого натрия (5-7 куб. см), добавляют (0,100±0,001) г амилоризина или пектофоэтидина, взвешенного на весах 2-го класса точности, 0,5 куб. см толуола, помещают в термостат и выдерживают 14-16 ч при (37±1)°С.

Затем гидролизат охлаждают до (25±5)°С, переносят в мерную колбу вместимостью 250 куб. см, доводят объем до метки дистиллированной водой и фильтруют.

Если необходимо прервать измерение на 1-2 дня, то перед доведением объема до 250 куб. см гидролизат кипятят 5 мин на водяной бане.

До проведения измерения фильтрат хранят в плотно закрытой колбе в темном месте при (6±2)°С.

5.10. Очистка фильтрата

Смешивают 25 куб. см фильтрата, полученного по 5.9 и 25 куб. см изобутилового спирта, встряхивают 5 мин. и разделяют слои с помощью делительной воронки. Нижний слой сливают в мерную колбу вместимостью 25 куб. см и доводят объем до метки дистиллированной водой. Верхний спиртовой слой отбрасывают. Количество проб фильтрата и стандартного раствора для проведения измерений берут с учетом двух параллельных измерений.

5.11. Окисление тиамина в тиохром

По 5 куб. см фильтрата отбирают в четыре колбы вместимостью 100 куб. см, добавляют по 2 куб. см этилового спирта и встряхивают 1 мин.

В две колбы добавляют по 1,2 куб. см окислительной смеси, в две другие - по 1,2 куб. см водного раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,3 г/куб. см (холостая проба), встряхивают 2 мин.

Во все четыре колбы добавляют по 13 куб. см изобутилового спирта, встряхивают 3 мин, ставят в темное место на 10 мин и разделяют слои в делительной воронке.

Нижний слой отбрасывают, к верхнему приливают 2 куб. см этилового спирта для осветления и переносят в конические колбы.

Окисление тиамина в тиохром проводят и в рабочем растворе витамина B1 (стандарт). В четыре колбы отбирают по 1 куб. см рабочего раствора витамина В1, добавляют по 4 куб. см дистиллированной воды и далее повторяют операции, как при окислении фильтрата.

6. ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЯ

Интенсивность флюоресценции тиохрома измеряют на флюорометре со светофильтрами, используемыми для витамина В1, имеющими максимум пропускания в области от 320 до 390 нм (В1-первичный) и от 400 до 580 нм (В1-вторичный), начиная с проб стандартного раствора.

Интервал определяемых концентраций тиамина составляет от 0,1 до 0,4 мкг/куб. см раствора, поступающего на измерение флюоресценции.

7. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

ИЗМЕРЕНИЯ

Массовую долю витамина B1 (тиамина) X, млн-1, вычисляют по формуле:

где: А - среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для анализируемого образца;

A1 - среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для холостой пробы к анализируемому образцу;

m - масса тиамина в 1 куб. см рабочего раствора, мкг;

V- общий объем гидролизата, куб. см;

V2 - объем гидролизата, взятый на очистку от примесей, куб. см;

А2 - среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для стандартного раствора тиамина;

А3 - среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для холостой пробы к стандартному образцу;

m1 - масса продукта, взятая для анализа, г.

V1 - объем анализируемого раствора, взятый для окисления тиамина в тиохром, куб. см;

V3 - объем после стадии очистки фильтрата, куб. см.

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.

Относительная погрешность измерения массовой доли витамина В1 - ±30% при доверительной вероятности Р = 0,95.

Расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 30% среднего арифметического значения результатов измерений.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 30% среднего арифметического значения результатов измерений.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(справочное)

БИБЛИОГРАФИЯ

[1] ТУ 25-1819.0021-90 Секундомеры механические "Слава"

[2] ГФ СССР-X ст. 673 Тиамина хлорид (витамин В1)

[3] ОСТ 64 037-87 Препарат ферментный. Амилоризин П10Х. Технические условия

[4] ТУ 64 1304-87 Пектофоэтидин П10Х

УДК 637.1:543.06:006.354 МКС 67.100.10 Н19 ОКСТУ 9209

Ключевые слова: витамин B1 (тиамин), рабочий раствор, основной стандартный раствор, массовая концентрация, гидролиз, окисление, флюоресценция